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真菌感染的实验室诊断研究进展

2010-03-13365必发娱乐:检验地带 阅读: 【字号:
导读: 真菌感染在临床上颇为常见。它不仅包括侵犯表皮角质层、毛发和甲板的浅部真菌感染,包括侵犯真皮、皮下组织和内脏器官的深部真菌病。近20年来,在临床上随着广谱抗生素、免抑制剂、细胞毒药物的广泛应用;.器官移植、导管技术及静脉高营养等技术的开展;严重

       真菌感染在临床上颇为常见。它不仅包括侵犯表皮角质层、毛发和甲板的浅部真菌感染,包括侵犯真皮、皮下组织和内脏器官的深部真菌病。近20年来,在临床上随着广谱抗生素、免抑制剂、细胞毒药物的广泛应用;.器官移植、导管技术及静脉高营养等技术的开展;严重疾病恶性肿瘤糖尿病艾滋病等使免疫缺陷宿主不断增多,真菌感染率,特别是系统性条件致病真菌的感染率在不断上升。实验室检查是临床诊断真菌感染的重要依据,常规的实验室诊断法包括:直接镜检法和培养法、病理学方法、血清学方法和分子生物学方法。本文就这几方面进行综述。 

    一、直接镜检法和培养法

    直接镜检法和培养检查法是形态学检查的基本方法,直接镜检是真菌学检查最经典的方法,具有快速、简便的特点。但阳性率较低,1次取材直接涂片法的漏诊率高达45%,而3次取材直接镜检的累积阳性率可达99%,因此,阴性结果不能排除诊断,与培养检查结合才能确诊。培养检查法可进—步提高病原体检出的阳性率,验证直接镜检的结果,同时确定致病菌的种类。某些真菌感染的组织寄生形态具有特征性,对于诊断具有重要意义,如念珠菌感染在组织中可以同时发现酵母细胞和假菌丝:隐球菌感染可见带有荚膜的酵母细胞:曲霉菌感染可见五色、45°分支分隔的菌丝:毛霉菌感染可见粗大无分隔呈直角分支的菌丝;组织细胞内的酵母细胞常提示组织胞浆菌或马尔尼菲青霉菌感染:棕色菌丝和/或孢子常提示暗色真菌感染。通过碘酸-雪文氏染色PAS和银染等特殊染色可以更清楚地显示真菌细胞。

    根据研究应用显色培养法,经37°C孵育48h观察菌落色泽和形态即可做出鉴定,阳性率为88.6%。为了提高念珠菌属血培养阳性串,最重要的进展是使用解离离心管和血培养自动监测培养瓶。解离离心管主要是通过溶细胞混合物将巨噬细胞中吞噬的真菌成份释放,并且将补体和一些影响真菌细胞活力的抗微生物因子灭活,然后进行培养。这种方法能够缩短多器官受累患者血培养阳性的时间,但价格昂贵。血培养自动监系统目前有BacT/ALERT 3D和BACTEC9240    2种,前者在有氧培养基上检出光滑念珠菌时间明显缩短。此外,还有一些可以连续测定压力变化的血培养系统。除血培养外,其他体液如尿液也可以进行培养,不过其阳性结果应当结合患者病情和治疗情况。

    二、组织病理学检查

    组织病理学检查对于确定致病菌在组织内寄生并了解宿主的反应十分重要,而且一旦在组织切片中发现真菌菌丝和/或孢子,即为诊断的有力证据。其结果与直接镜检和培养相结合对诊断的意义更大。除常用的真菌病原体染色方法外,免疫组化特异抗体染色可对临床常见条件致病菌做出特异性诊断。马蕾等采用微波Envision免疫组化二步法对34例深部真菌病患者的标本用福尔马林固定,石蜡包埋切片进行PAS染色,微波Envision免疫组织化学标记。结果示免疫组织化学染色16例为可疑曲霉菌感染中14例阳性;11例可疑隐球菌感染全部阳性;7例念珠菌感染6例阳性。菌体染色清晰无背景。因此,微波Envision免疫组化二步法应用于深部真菌感染检测具有高敏感、低背景、快速简便的特点,在真菌病的临床病理诊断中具有很好的应用价值。有学者指出免疫组化方法较PAS方法可特异地对白念珠菌、新型隐球菌和曲霉菌感染作出诊断。

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