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糖化血红蛋白的检测方法简介

2011-08-10365必发娱乐:本站综合 阅读: 【字号:
导读: 糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。 成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA2(占2.5%),HbF(占0.2%)。

    糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。

    成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA2(占2.5%),HbF(占0.2%)。当HbA中的部分血红蛋白被糖基化后,其中由于HbA的β链N末端的缬氨酸分子与葡萄糖等己糖分子相结合而使其在血红蛋白电泳中成为HbA之前的快泳、HbA1组分,在离子交换柱层析中亦在HbA之前首先被洗脱,糖化Hb可分为HbA1a(其中与1,6-二磷酸果糖结合的为HbA1a1;与6-磷酸葡萄糖结合的为HbA1a2),HbA1b(尚无明确定义,包括HbA1b1,HbA1b2,HbA1b3),HbA1e(与葡萄糖结合)和HbA1d(α链和β链内氨基以及α链的N末端基团上的烯化血红蛋白;包括HbA1d1,HbA1d2,HbA1d3)共九种。最重要的是HbA1c.HbA1e的生成量取决于血糖的浓度,正常人约占4%~6%。由于红细胞的半寿期是60天,所以GHb的测定可以反映测定前8周左右病人的平均血糖水平。
 

  目前最常用的HbA1c测定方法是离子交换层析法和电泳法。前者精密度高、重复性好且操作简单,已被临床广泛采用。国内主要采用Bio-Rex70阳离子树脂微柱层析法,其微柱可重复使用多次。正常参考值:HbA1c:X±2s=6.5±1.5%;>8.0%为HbA1c增高。  

     离子交换层析法  分手工和自动两种。手工微柱有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司产品,手工微柱操作会受到人工因素影响,可能会洗脱不完全或过度洗脱,并受外界环境温度的影响,而某些血红蛋白如HbF异常增加时,也会与糖化血红蛋白同时洗脱,从而使结果产生偏差。   相应的仪器以英国DREW SCIENTIFIC公司DS5糖化血红蛋白仪为例(BIO-RAD公司DIASTA亦为同一产品),采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术可全自动分离血红蛋白的变异体与亚型,除可测定糖化血红蛋白外,还可同时检测出HbS与HbC的存在与否,在计算糖化血红蛋白值时会自动扣除变异体产生的影响,从而使结果更为准确,可靠,CV值小于2%。同时该仪器配有专门的稀释溶血器,可直接进行全血操作,5分钟即可报告结果,并自动储存样品检测结果,层析柱价格也较为低廉,适合于较多标本的医院检测。更大型的仪器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,除可全自动测定糖化血红蛋白外,还可分离检测血红蛋白的600多种变异体和亚型,用于地中海贫血等疾病的诊断。  

     亲和层析  是目前糖化血红蛋白检测的新方法,该方法特异性强。英国DREW SCIENTIFIC公司的DSI糖化血红蛋白分析仪日前刚刚获得美国食品药品管理署(FDA)的认可获准上市,作为目前世界唯一的快速床边糖化血红蛋白仪,它采用硼酸亲和层析法,只需10ul全血即可在4分钟内快速分离检测糖化血红蛋白,为临床提供即时的化验结果,尤其对于小儿患者而言更有优势。其检测结果也完全达到并超过临床要求,CV值在5%以内。  

     高压液相-检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准 。仪器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,可全自动分离测定糖化血红蛋白及血红蛋白的变异体和亚型,但仪器的操作保养要求较高。 美国早已实行了糖化血红蛋白检测的标准化,统一采用高压液相色谱法(HPLC法)检测糖化血红蛋白,目前美国ADA已将HbA1c作为诊断糖尿病的新指标。   

     免疫凝集法  原理是糖化血红蛋白与相应的单抗结合进而发生凝集反应,通过测定吸光度来表示凝集量,可用于全自动生化分析仪上进行测定。要求对样品成批试验,每次试验均应使用一个新试剂盒,操作前应注意混匀试剂。免疫凝集法测定,精密度较差,CV值一般大于6%。  

     离子捕获法  亦是新近发展起来的新方法,代表仪器有Abbott的IMX,其原理是糖化血红蛋白与相应抗体结合后,联以荧光标记物,形成一反应复合物,再联结带负电荷的多聚阴离子复合物,而在IMX反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四胺合物,使纤维表面带正电,使前述的反应复合物吸附在纤维表面,经过一系列清洗后测定其荧光强度,从而得到糖化血红蛋白的浓度,该方法适用于成批糖化血红蛋白标本的检测。  

     电泳方法  如毛细管电泳也能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白的变异体,但目前尚无商品化,具有批量样本通过能力的仪器面世,相当程度地限制了该方法的临床应用,但优点是成本低廉、普及性强。 

(必发365娱乐:admin)
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