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  • [分子生物学] PCR产物克隆方法 日期:2011-07-11 22:26:55 点击:655 好评:0

    PCR产物克隆方法: 1. 平端连接 通常情况下,PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接,但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性,能在两6条DNA链的3末端加上一个多余的碱基,使合成的PCR产物成为3突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子...

  • [分子生物学] 扩增较大片段DNA的PCR方法 日期:2011-07-06 14:01:52 点击:352 好评:0

    一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限,即目标产物精确程度和合成片段的大...

  • [分子生物学] PCR扩增产物的分析 日期:2011-06-26 15:36:24 点击:1249 好评:2

    PCR产物是否为特异性扩增 ,其结果是否准确可靠,必须对其进行严格的分析与鉴定,才能得出正确的结论。PCR产物的分析,可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。 1. 凝胶电泳分析:PCR产物电泳,EB溴乙锭染色紫外灯下观察,初步判断产物的特异性。PCR...

  • [分子生物学] PCR反应条件调控 日期:2011-06-26 15:33:09 点击:238 好评:0

    1、 温度与时间的设置: 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90~95℃变性,再迅速冷却至40 ~60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70~75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延...

  • [分子生物学] PCR反应体系 日期:2011-06-26 15:31:37 点击:611 好评:2

    反应体系试剂:1、 反应缓冲体系:提供PCR反应所必需的合适的酸碱度和某些离子。目前最常用的缓冲液是10~50mmol/L的Tris-HCl (pH8.3~8.8,20℃),在72℃(通常PCR反应延长阶段的温度)时,其pH值为7.2左右,故在实际的PCR反应体系中,其pH值变化于6.8~7.8之间...

  • [分子生物学] PCR技术在结核杆菌诊断中的应用 日期:2011-06-08 21:49:35 点击:400 好评:0

    结核杆菌可以导致全身性疾病,特别是在发展中国家,其发病率较高,危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大,对抗痨药物的耐药性增加,从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断,但对某些病...

  • [分子生物学] 细菌感染的分子生物学检测 日期:2011-06-01 10:13:00 点击:268 好评:0

    (一)常用的分子生物学技术 1.核酸杂交 常用的杂交技术有:斑点杂交、southern印迹、原位杂交、Northern印迹等。探针的种类有全染色体DNA探针、染色体克隆片段DNA探针、质粒DNA探针、rRNA基因探针、寡核苷酸探针等。 2.核酸扩增技术 核酸扩增技术是分子生物学...

  • [分子生物学] 原位PCR的实验原理 日期:2011-05-30 09:12:20 点击:256 好评:0

    原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR仪反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞,又能标出靶序列在...

  • [分子生物学] 什么是梯度PCR? 日期:2011-05-30 09:10:42 点击:964 好评:0

    对于一个PCR反应,虽然有各种各样的PCR仪引物设计软件或者经验公式计算最适的退火温度,可是由于模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能P出来结果,细微的变化对结果都可能产生决定性的影响,因而摸条件一度是让人很头疼的问题...

  • [仪器应用] PCR仪技术简述 日期:2011-05-30 09:04:33 点击:260 好评:0

    一、PCR概述 1、什么是PCR仪 聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。由美国科学家PE(PerkinElmer珀金-埃尔默)遗传部的Dr.Mullis发明,由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义,...

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