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  • [分子生物学] 建立cDNA文库时cDNA的合成条件 日期:2010-08-24 15:48:09 点击:237 好评:0

     建立cDNA文库并从中筛选出目的基因是一种十分有效的寻找未知基因的手段.cDNA文库的构建过程可粗分为总RNA的提取,mRNA的纯化,cDNA的合成以及将cDNA克隆入载体等几个主要步骤,其中cDNA的合成是其中最复杂也是文库建立成败的关键步骤.我们在建立肝癌细胞cDN...

  • [分子生物学] 减少PCR产物中引物二聚体的方法 日期:2010-08-09 19:34:36 点击:237 好评:0

    1.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法。 2.可能模板有问题,模板浓度过小,适当加大模板量。 3.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度。 4.将上下引物混合后,在100℃的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷...

  • [科室管理] 如何迎接临床基因扩增检验实验室技术验收 日期:2010-07-30 11:32:42 点击:767 好评:-1

    临床基因扩增检验实验室主要应用把PCR(聚合酶链反应)技术应用于疾病的诊断与治疗监测。PCR技术发明是生物医学领域的一项革命性创举,具有深远历史意义,但在上世纪九十年代中国,在我国由于部分医部机构受利益的驱动,在缺乏技术、设备以及规范化管理的情...

  • [分子生物学] 实用DNA突变技术要点 日期:2010-07-30 11:24:10 点击:202 好评:0

    PCR法扩增启动子5端系列缺失突变体 采用PCR方法从基因组中扩增目的基因的全长启动子,在所扩增的片段两端分别引入限制性内切酶位点,以用于构建pGL3 basic报告基因表达质粒载体。同样采用PCR方法,以目的基因全长启动子报告基因表达质粒为模板分别扩增目的基...

  • [分子生物学] 自杀性质粒 日期:2010-07-20 11:11:49 点击:222 好评:0

    自杀质粒(suicide plasmid):通常为R质粒的衍生质粒,常有宿主范围广的特点,具有接合转移基因。它的复制需要一种特殊的蛋白,大多数细菌不产生这种蛋白质,因此,当进入寄主细胞时,要么不能复制,被消除,要么被整合入染色体上,和染色体一起复制。利用...

  • [分子生物学] 甲基化荧光PCR检测 日期:2010-07-16 11:55:55 点击:136 好评:0

    甲基化荧光检测(methylight)是利用荧光定量性PCR检测亚硫酸氢钠处理后的序列改变。在TaqManR技术中,可以使用3种不同的单核苷酸(正义引物、反义引物和荧光杂交探针),进行不同序列的检测。与已存在的技术相比,甲基化荧光检测最明显的优点就是能同时对几百甚...

  • [分子生物学] 基因内的甲基化作用 日期:2010-07-09 10:42:22 点击:118 好评:0

    DNA甲基化在通过其对基因表达的效应来保持细胞身份中扮演重要角色。5'启动子的甲基化抑制基因表达,而基因内的DNA甲基化(即甲基化过程发生在一个基因体本身的内部)作用的研究却不是很多,仍然存在争议。 现在,一个基于测序技术的、来自人脑的下一代DNA甲...

  • [分子生物学] PCR-ELISA端粒酶检测法 日期:2010-07-08 21:19:50 点击:229 好评:0

    端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体...

  • [分子生物学] 基因专题 日期:2010-07-07 22:39:05 点击:322 好评:0

    DNA和其分子基因(遗传因子)是遗传的物质基础,是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段。通过使用基因芯片分析人类基因组,可找出致病的遗传基因。...

  • [分子生物学] 乙肝病毒的基因分型 日期:2010-06-15 09:26:27 点击:2469 好评:2

     HBV根据抗原决定簇的差异可划分为4个不 同的血清型和9个血清亚型, 通过对HBV全基因序列比较后发现,血清亚型的区分并不能反应HBV基因组的差异。根据HBV全基因核苷酸序列异源性≥ 8.0% 或者S基因区核苷酸序列异源性≥4.0% , 将不同病毒株分为A-H 8个基因...

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