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PCR扩增出现片状拖带或涂抹带原因及建议

2010-05-29365必发娱乐:本站 阅读: 【字号:
导读: PCR扩增出现片状拖带或涂抹带 原因 建议 模板DNA 模板不纯 纯化模板或使用试剂盒提取DNA 耐热聚合酶 酶量过多 以0.5U为间隔适当减少酶量 Mg2+浓度 Mg2+浓度过高 适当降低Mg2+浓度,从1mM到3mM,间隔0.5mM进行一系列反应,确定对于每个模板和引物对的最佳镁离

PCR扩增出现片状拖带或涂抹带

 

 

 

 

原因

建议

模板DNA

模板不纯

纯化模板或使用试剂盒提取DNA

耐热聚合酶

酶量过多

以0.5U为间隔适当减少酶量

Mg2+浓度

Mg2+浓度过高

适当降低Mg2+浓度,从1mM到3mM,间隔0.5mM进行一系列反应,确定对于每个模板和引物对的最佳镁离子浓度。

dNTP

dNTP浓度过高

适当降低dNTP浓度

退火温度

退火温度过低

适当提高退火温度

PCR循环次数

PCR循环次数过多

减少PCR循环次数

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