当前位置: 365必发娱乐 > 检验医学 > 分子生物学 > 正文
关注:

荧光定量PCR仪器大观

2009-11-02365必发娱乐:检验世界网 阅读: 【字号:
导读: 荧光定量PCR技术已成为临床分子检测的重要手段之一,其以敏感性、特异性而被越来越多的科研人员所看好,荧光定量PCR仪的性能与检测结果的准确性密切相关

      荧光定量PCR技术已成为临床分子检测的重要手段之一,其以敏感性、特异性而被越来越多的科研人员所看好,荧光定量PCR仪的性能与检测结果的准确性密切相关。自美国应用生物系统公司自1996年推出第一台市场化的荧光定量PCR仪以来, 现在国内很多厂家都在生产此类仪器,但高端产品基本还被ABI、 Roche、 Bio-Rad等公司所垄断,现在就将几个主要厂家的仪器介绍给广大读者,随着国内对PCR诊断的再认识,相信荧光定量PCR技术会很快走进临床检验阶段。
按照仪器的加热性能可以将它们划归为2类:
    一类是半导体(半导体+电热丝)加热。硅加热是使用最普遍的一种,导热好,易自动化,速度快,直接加热降温,效果好,但由于其使用的介质是金属,与反应管很难做到无缝接触。ABI、Bio—Rad等都属于这一种。主要代表机型包括:
                          

美国应用生物公司的实时荧光定量PCR Prism7500
    ABI(美国应用生物)公司于1996年推出荧光定量PCR技术,ABI(美国应用生物)公司主要销售Prism7000、7300、7500、7900HT 4种实时荧光定量PCR仪。其中,Prism7000为四色荧光,只能用于2种染料,TaqMan和SYBRGreen I,现在已经停产; Prisr 7300为四色荧光,能够有效地分辨包括FAM™SYBRGreen I、VICnq/J0E 、TAMRA™和ROX™在内的多种荧光染料,是7000的升级机型;Prism7500应该是ABI公司最成功的产品,各方面性能都不错。 
    7500型实时荧光定量PCR系统的全部96个样品孔采用同一卤钨灯作为光源,卤钨灯光通过五色光源滤光片后激发每一个分析样品。卤钨灯光源增加光源滤光片后改善了长波长红色荧光标记的激发效果,可以大大提高红色荧光检测的灵敏度和定量分析的准确性。激发后的荧光再通过五色荧光滤光片到达CCD照相机检测信号。五色荧光滤光片能够有效地分辨包括:FAM™/SYBR Green I, VIC/JOE, NED™/TAMRA™/ Cy3, ROX™/Texas Red和Cy5在内的多种荧光染料。光源易更换,但是寿命相对较短。
    7500型实时荧光定量PCR系统的标准模式采用25-100微升反应体积,可以采用96孔板或单管/8联管进行实验反应。另外7500还可以升级为快速热循环样品基座,该升级为选购件,由ABI公司工程师负责安装。快速热循环样品基座采用新型96孔反应板,这种反应板的管内液体上方的空间较小,可以支持5-30微升反应体积的实验。采用样品基座升级后的7500,新型96孔反应板和新型快速热循环定量PCR预混试剂,实时定量PCR实验可以在40分钟内完成,实验效果与标准2小时模式完全一致。
    在使用TaqMan的RNA合成酶P仪器安装板的情况下,7500型实时荧光定量PCR系统能够区分5,000和10,000模板拷贝数,可以检测50ul反应体积单一报告荧光TaqMan实验中仅10个起始拷贝数的模板,其置信度高达99.7%,可达  9个数量级的线性范围。
    高效平台-7900HT系统是为支持高通量而构建的,光学系统经优化以适用于384~L板荧光信号的激活和实时检测。7300、7500、7900均可进行基因表达分析,病原体绝对定量分析,SNP基因型分析以及以阳性内对照为基础的阳性/阴性结果判定。但是所有定量实验都依赖于染料ROX,用于校正。
    ABI的7300、7500、7900均可进行基因表达分析,病原体绝对定量分析,SNP基因型分析以及以阳性内对照为基础的阳性/阴性结果判定。但是所有定量实验都依赖于染料ROX,用于校正。
                    
美国Bio—Rad公司实时荧光定量PCR  iCycler
    Bio—Rad公司的iCycler PCR相对于其他仪器还是非常有特色的,主要体现如下:
具有梯度PCR功能,独特的96孔板温度梯度控制,一次性摸索8个不同的温度条件,可用于快速优化实验条件,这一点世其他实时荧光PCR仪器所没有的,是iCycler和MJ系列仪器所特有的一项功能。特具动态温控功能,保证梯度反应的准确性和均一性外,还可使每个反应孔以不同的变温速率下降或上升,保证每个反应孔在进行梯度反应时的实际加热时间绝对一致。许多同类仪器,温度准确性随着温度的增加而降低;iCycler PCR 仪按照NIST 可溯源的过程生产,保证在全部的温度范围,温度准确性在+0.3C。同样,样品模块的温度均一性在较高温度下也很难保持,然而iCycler在全部的温度范围,保证温度均一性在+0.4C;循环速度对于多用户和高通量的应用来说,也是苛刻的条件,iCycler PCR 仪的升降温速度可以达到至少3.3C/秒,并可以通过模块、样品内探头以及算法控制温度;免费的固件升级可以实现温度梯度功能;温度梯度功能能够最大限度方便试剂和温度的优化;显示温度的准确性保证标准检测的平稳变换。3、专利技术intersifier荧光放大器保证了极高的检测灵敏度。4、可对加样误差进行校正,不依赖于ROX校正。
Bio-Rad iCycler PCR仪主要技术: 
内存容量 最多可存255个反应程序文件   
操作系统  Window   
大小 (宽x 长 x 高) 26 x 55 x 23 cm   
重量 11.8 Kg (26lb)   
平均运转时间 1-2小时   
检测硬件 CCD镜头, 多波长   
检测光路 96同一光路同时检测   
光源 卤素灯   
动力学范围 9X   
支付的化学方式  TAQMAN 探针可作定量,作熔点曲线分析,SYBRGEEN I 分子信标,又FRET探针,MGB 探针    定量方法 外对照内对照    
加热模式 固体块,半导体加热,3.3℃/秒   
反应体系 96x0.2ml PCR反应管 
  (必发365娱乐:admin)

------分隔线----------------------------

检验医学医学检验 POCT 考试大纲 DNA HE4 PCR OD值 CV值 PCT 血液 检验结果 乙肝 PSA 健康 贫血 疾病
Baidu