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感染性疾病的分子生物学检验

2012-09-21365必发娱乐:365必发娱乐 阅读: 【字号:
导读: 病原体的检测方法包括病原微生物的分离培养、免疫学检测和分子生物学方法检测。病原体的分离培养大多费时,阳性率也较低。而免疫学方法虽较敏感,但有些微生物可能会有共同抗原导致出现假阳性或者假阴性;部分抗体检测难以辨别是现行感染还是既往感染。而利用

病原体的检测方法包括病原微生物的分离培养、免疫学检测和分子生物学方法检测。病原体的分离培养大多费时,阳性率也较低。而免疫学方法虽较敏感,但有些微生物可能会有共同抗原导致出现假阳性或者假阴性;部分抗体检测难以辨别是现行感染还是既往感染。而利用分子生物学技术进行诊断具有高度灵敏性和特异性。操作简便、迅速。因此广泛应用于病毒、细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体以及寄生虫感染等感染性疾病的诊断。

一、病毒

可以引起人类感染性疾病的病毒种类很多,均可造成相应的病毒血症并侵入特定脏器。应用分子生物学技术,可以在早期检测到病毒,为早期诊断提供依据。目前,常用的技术是核酸杂交和PCR技术。临床上应用PCR技术诊断病毒感染须遵守国家有关的法规,购买有批号的检测试剂,并严格按照说明书进行操作。以下简单例举常见的几种病毒检测方法。

1.人乳头瘤病毒  人乳头瘤病毒是双链DNA病毒,迄今难以用传统的病毒培养及血清学检测,只能采用分子生物学技术来诊断。主要方法有核酸杂交和PCR或两者相结合。

2.肝炎病毒  部分可用基因诊断的肝炎病毒见表7-3-4。

 表7-3-4  部分可用基因诊断的肝炎病毒

病毒 标本 目的  方法 用途

HAV粪便、污染物及可疑食品检测病原体及其亚型核酸杂交、PCR临床诊断、流行病学调查

 HBV血清、组织检测病原体及其亚型、变异核酸杂交、定量PCR、原位PCR临床诊断、流行病学调查

HCV血清、组织检测病原体及其亚型、变异RT-PCR、原位PCR临床诊断、流行病学调查

 HEV粪便、污染物及可疑食品检测病原体及其亚型核酸杂交、PCR临床诊断、流行病学调查

TTV血清、组织检测病原体及其亚型、变异核酸杂交、原位PCR临床诊断、流行病学调查

HGV血清、组织检测病原体及其亚型、变异核酸杂交、原位PCR临床诊断、流行病学调查

3.HIV 

HIV是艾滋病的病原体。HIV-DNA可整合到宿主基因组中,因此在相当长的时期内HIV处于潜伏状态。整合的HIV-DNA以很低的拷贝数存在,故需要用非常灵敏而又特异的方法进行检测和研究。体外培养法、逆转录酶法、外周血中抗原直接测定等方法费时、费力、稳定性较差。原位杂交可直接检测细胞内病毒核酸;Southern

印迹法可对淋巴细胞中的HIV-DNA进行分析;PCR技术敏感、特异,可对多种标本的HIV进行检测。这些基因诊断技术可用于追踪HIV的自然感染史;可在其他血清学和病毒学标志出现前检出HIV序列。因此可用于判定无症状且血清学检测阴性患者潜在的HIV传播的可能性;并可用于检测长潜伏期病人;在婴儿出生后最初的6~9个月期间,基因诊断可判定婴儿是否真正被HIV感染。此外,基因诊断在血制品的检测中也发挥主要作用。

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